Серологични реакции: видове, употреба

Лабораторната диагностика на практически всички инфекциозни заболявания се основава на откриването на антитела в кръвта на пациента, които са разработени за антигените на патогена, чрез методи на серологични реакции. Те влязоха в медицинската практика от края на деветнадесети - началото на двадесети век.

Развитието на науката спомогна за определяне на антигенната структура на микробите и химичните формули на техните токсини. Това позволява да се създават не само терапевтични, но и диагностични серуми. Те се получават чрез въвеждане на отслабени патогени в лабораторни животни. След няколко дни на излагане от кръвта на зайци или мишки препаратите, използвани за идентифициране на микробите или техните токсини, се приготвят при използване на серологични реакции.

Външната проява на такава реакция зависи от условията на нейната формулация и от състоянието на антигените в кръвта на пациента. Ако частиците микроби са неразтворими, те се утаяват, лизират, свързват или имобилизират в серума. Ако антигените са разтворими, тогава настъпва явлението неутрализация или утаяване.

Реакцията на аглутинация (РА)

Аглутинацията на серологичните реакции е много специфична. Тя е лесна за изпълнение и е достатъчно ясна, за да определи бързо присъствието на антигени в серума на пациента. Използва се за установяване на реакцията на Видал (диагностика на тиф и паратипоид) и Veigl (Тиф).

Тя се основава на специфичното взаимодействие между човешки антитела (или аглутинини) и микробни клетки (аглутиногени). След взаимодействието им се образуват частици, които се утаяват. Това е положителен знак. За формулирането на реакцията, живи или убити микробни агенти, гъби, протозои, кръвни клетки и соматични клетки.

Химически, реакцията се разделя на два етапа:

1. Специфично съединение на антитела (АТ) с антигени (AH).
2. Неспецифично - утаяване на конгломерати от AG-AT, т.е. образуване на аглутинат.

Непряката реакция на аглутинация (RPHA)

Тази реакция е по-чувствителна от предишната. Използва се за диагностициране на заболявания, причинени от бактерии, интрацелуларни паразити, протозои. Тя е толкова специфична, че може да открие дори много ниска концентрация на антитела.

За да го произведем, използваме пречистени еритроцити от агнешко и червени кръвни клетки на човек, предварително третирани с антитела или антигени (това зависи от това, което лабораторията иска да намери). В някои случаи човешките еритроцити се лекуват с имуноглобулини. Счита се, че серологичните реакции на еритроцитите са настъпили, ако се поставят на дъното на тръбата. Положителна реакция може да се каже, когато клетките са подредени под формата на обърнат чадър, заемащ цялото дъно. Отрицателната реакция се отчита, ако червените кръвни клетки са се установили в колона или във формата на бутон в центъра на дъното.

Реакцията на утаяване (RP)

Серологичните реакции от този тип служат за откриване на изключително малки частици от антигени. Те могат да бъдат, например, протеини (или части от тях), протеинови съединения с липиди или въглехидрати, части от бактерии, техните токсини.

Серуми за реакцията се получават чрез изкуствено заразяване на животни, обикновено на зайци. Този метод може да получи абсолютно всеки утаен серум. Провеждането на реакциите на серологично утаяване е подобно на механизма на действие при реакцията на аглутинация. Антителата, съдържащи се в серума, се комбинират с антигени в колоиден разтвор, образуващи големи протеинови молекули, които се отлагат на дъното на тръбата или върху субстрат (гел). Този метод се счита за много специфичен и може да открие дори незначителни количества от дадено вещество.

Използва се за диагностициране на чума, туларемия, антракс, менингит и други заболявания. Освен това той участва в съдебномедицинския преглед.

Реакция на утаяване на гел

Серологичните реакции могат да се извършват не само в течна среда, но и в агаров гел. Това се нарича дифузно утаяване. С негова помощ се изследва съставът на сложни антигенни смеси. Този метод се основава на хемотаксиса на антигени към антитела и обратно. В гела те се придвижват един към друг с различни скорости и срещат форми на утаяване. Всяка линия е един набор от AG-AT.

Реакцията на неутрализиране на екзотоксин с антитоксин (РН)

Антитоксичните серуми са в състояние да неутрализират ефекта на екзотоксин, който произвежда микроорганизми. Това е основата за тези серологични реакции. Микробиологията използва този метод за титриране на серуми, токсини и токсоиди, както и определяне на тяхната терапевтична активност. Неутрализирането на токсина се определя от конвенционалните единици - AE.

В допълнение, поради тази реакция е възможно да се определи вида или типа на екзотоксин, принадлежащ. Това се използва при диагностицирането на тетанус, дифтерия, ботулизъм. Проучването може да се извърши както "на стъклото", така и в гела.

Лизисната реакция (RL)

Импулсният серум, който навлиза в тялото на пациента, има освен основната си функция пасивен имунитет, също лизиращи свойства. Той е способен да разтваря микробни агенти, клетъчни чужди елементи и вируси, влизащи в тялото на пациента. В зависимост от специфичността на антителата, включени в серумните изолира bactericidin, цитолизини, spirohetoliziny, хемолизини и други.

Тези специфични антитела се наричат ​​"комплемент". Той се съдържа в почти всички телесни течности, има сложна протеинова структура и е изключително чувствителен към треска, треперене, киселинност и директна слънчева светлина. Но в изсушеното състояние той може да запази свойствата си на лизиране до шест месеца.

Съществуват типове серологични реакции от този тип:

- bacteriolysis;

- хемолиза.

Бактериолизата се извършва чрез кръвния серум на пациента и специфичен имунен серум с живи микроби. Ако има достатъчно количество добавка в кръвта, изследователят ще види бактериалния лизис и реакцията ще се счита за положителна.

Втората серологична реакция на кръвта е, че суспенсията от еритроцити на пациента се третира със серум, съдържащ хемолизини, които се активират само в присъствието на определен комплимент. Ако има такава, лабораторният асистент наблюдава разтварянето на червените кръвни клетки. Тази реакция се използва широко в съвременната медицина за определяне на титъра на комплемента (т.е. най-малкото количество, предизвикващо лизиса на червените кръвни клетки) в кръвния серум и за анализа на свързването на комплемента. Така се извършва серологичният отговор на сифилис - Реакцията на Васерман.

Реакцията на фиксиране на комплемента (RCC)

Тази реакция се използва за откриване в кръвния серум на пациент на антитяло срещу инфекциозен агент, както и за идентифициране на патогена от неговата антигенна структура.

До този момент описахме прости серологични реакции. RSK се счита за сложна реакция, тъй като взаимодейства не с две, а с три елемента: антитяло, антиген и комплемент. Същността му се крие във факта, че взаимодействието между антитялото и антигена се осъществява само в присъствието на комплементни протеини, които се адсорбират върху повърхността на образувания AG-AT комплекс.

Самите антигени, след добавяне на комплемент, преминават през значителни промени, които показват качеството на реакцията. Това може да бъде лизиране, хемолиза, имобилизация, бактерицидно или бактериостатично действие.

Самата реакция се извършва в две фази:

1. Образуване на комплекс антиген-антитяло, който е визуално невидим за изследователя.
2. Промяна в антигена при действието на комплемента. Тази фаза често може да бъде проследена с невъоръжено око. Ако визуалният отговор не е видим, използвайте допълнителна индикаторна система, която ви позволява да откривате промени.

Индикаторна система

Тази реакция се основава на свързването на комплемента. Един час след формулирането на DSC, пречистените овчи еритроцити и хемолитичен серум, които не съдържат комплемент, се добавят към епруветката. Ако неконюгираният комплемент остава в епруветката, той ще се присъедини към AG-AT комплекс, образуван между овнешките клетки на кръвта и хемолизина и ще доведе до тяхното разтваряне. Това ще означава, че СРС е отрицателен. Ако червените кръвни клетки остават непокътнати, тогава, съответно, реакцията е положителна.

Реакцията на хемаглутиниране (RGA)

Има две фундаментално различни реакции на хемаглутинация. Един от тях е серологичен, той се използва за определяне на кръвните групи. В този случай еритроцитите взаимодействат с антитела.

И втората реакция не се отнася за серологични, тъй като червените кръвни клетки реагират с хемаглутинините, продуцирани от вирусите. Тъй като всеки агент действа само върху специфични еритроцити (пиле, агнешко, маймуна), тогава тази реакция може да се разглежда като тясно специфична.

Разберете, положителна реакция или отрицателна, това е възможно чрез местоположението на кръвните клетки на дъното на епруветката. Ако картината им прилича на обърнат чадър, тогава желаният вирус се намира в кръвта на пациента. И ако всички червени кръвни клетки се образуват като колона за монети, тогава няма непознати патогени.

Реакцията на инхибиране на хемаглутинацията (RTGA)

Това е много специфична реакция, която ви позволява да определите вида, вида на вируса или наличието на специфични антитела в серума на пациента.

Нейната същност се крие във факта, че антителата, добавени към епруветката с тестовия материал, предотвратяват утаяването на антигени върху червените кръвни клетки, като по този начин спират хемаглутинацията. Това е качествена индикация за наличието в кръвта на специфични антигени на конкретен желан вирус.

Реакцията на имунофлуоресценция (RIF)

Реакцията се основава на способността да се откриват AG-AT комплекси флуоресцентна микроскопия след третирането им с флуорохромни бои. Този метод е лесен за работа, не изисква разпределение на чиста култура и отнема малко време. Необходима е бърза диагностика на инфекциозни заболявания.

На практика тези серологични реакции се разделят на два вида: преки и косвени.

Директният RIF се получава с антиген, който е предварително обработен с флуоресцентен серум. И непреки е, че лекарството се първо се обработва с конвенционален diagnosticum съдържащ антитела към желания антиген и след това отново се прилага флуоресцентен суроватка, който е специфичен за протеините на комплекс К-AT и микробни клетки стават видими чрез микроскопия.