PCR анализ: какво е това? Как да направите теста за PCR правилно

Не много отдавна беше разработен надежден, много чувствителен и бърз метод за диагностициране на различни инфекциозни заболявания при хората. Този метод се нарича "PCR анализ". Какво е това, в какво?

История на откритието

Изобретен е методът на полимеразна верижна реакция (PCR) американски учен Кари Мълис през 1983 г. Първоначално патентован диагностичен метод компания "Cetus Corporation", в която работи неговият създател. През 1992 г. всички права и патенти бяха продадени на компанията "Hoffman-La Roche". След това се оказа, че паралелни подобни изследвания са били проведени и са записани от други американски биолози, като Алис Чен, Дейвид Едгар, Джон Трейл. През 1980 г. съветските учени А. Слюсаренко, А. Каледдин и А. С. Городецки. Следователно не беше възможно да се определи единственият притежател на права. Много изявени биохимици допринесоха за развитието на метода на полимеразна верижна реакция и патентоваха иновациите си. В момента PCR анализът се извършва навсякъде в специално оборудвани лаборатории.

Същността на PCR диагностичния метод

PCR анализ: какво е това и как работи? Същността на метода е да се увеличи в специфична микробна среда чрез специален ензим на ДНК полимеразата при изкуствени условия. За да направите това, умножете съществуващия ДНК материал. Така, в присъствието на патогенен микроорганизъм в пробата, количеството му ще бъде увеличено чрез биохимични лабораторни манипулации и бактерията не може да бъде открита в микроскоп.

Как се извършва материалното изследване?

Анализът изисква:

• шаблон ДНК;
• праймери, свързващи краищата на фрагмента от материал;
• термично стабилен ДНК полимеразен ензим;
• химични вещества, които гарантират правилното функциониране на ензимите;
• буферен разтвор, необходим за създаване на подходящи условия за растежа и развитието на ДНК материал.

  

За извършване на PCR се извършват 25-30 повторения, състоящи се от три етапа: денатуриране, отгряване и удължаване.

За анализиране на полимеразната верижна реакция се използва специално устройство - усилвател. Съвременното оборудване ви позволява да настроите необходимата програма за отопление и охлаждане на тръбите, за да премахнете грешките по време на диагностиката.

Къде се използва диагнозата?

Методът на полимеразна верижна реакция се използва в различни области на медицината:

• Съдебните учени го използват, за да идентифицират генетичен материал, като коса, слюнка или кръв;
• PCR анализът на кръвта помага за генотипизиране, например, за откриване на индивидуална генетично инженерна реакция към специфично лекарство;
• с помощта на такъв метод установяват съществуването на семейни връзки между хората;
• най-популярният PCR метод се превърна в медицинската диагностика за дефинирането на различни инфекциозни заболявания.

Какви инфекции разкриват PCR?

Така че, медицината отдавна и успешно е използвала анализа на PCR. Какво е това, вече научихме. И какви патогени могат да бъдат открити с него? Методът на PCR диагностицира следното инфекциозни заболявания:

• хепатит А, В, С;
• ureaplasmosis;
• кандидоза;
• хламидия;
• микоплазмоза;
• бактериална вагиноза;
• инфекциозна мононуклеоза;
• трихомониаза;
• папиломавирусна инфекция;
• туберкулоза;
• херпес инфекция на І и ІІ тип;
• Helicobacter Pylori инфекция;
• цитомегаловирус;
• дифтерия;
• салмонелоза;
• ХИВ инфекция.

  

Също така, PCR методи се използват при диагностицирането на рак.

Предимствата на метода

Диагностичната PCR има няколко предимства:

1. Висока чувствителност. Дори само с няколко ДНК молекули на микроорганизма, PCR анализът определя наличието на инфекция. Методът ще помогне при хронични и латентни заболявания. Често в такива случаи микроорганизмът е некултивиран по други начини.
2. За изследването е подходящ всеки материал, като слюнка, кръв, пол, коса, епителни клетки. Най-често срещан е кръвен тест и урогенитално намазка при PCR.

   

3. Тя не изисква продължително отглеждане на култури. Автоматизираният диагностичен процес ви позволява да получите резултатите от изследването след 4-5 часа.
4. Методът е почти 100% надежден. Проведени са само единични случаи на фалшив отрицателен резултат.
5. Способността да се идентифицират няколко вида патогени от единична проба от материал. Това не само ускорява процеса на диагностициране на заболяването, но също така значително намалява разходите за материали. Често лекарят предписва подробен PCR анализ. Цената на изследването, състояща се в дефиницията на шест патогени, е около 1500 рубли.

Препоръки за подготовка на анализа

За да бъдат резултатите надеждни в изследването за PCR, анализът трябва да се направи в съответствие с препоръките за предварителна подготовка за диагностика:

1. Преди да се откажете от слюнката, трябва да се въздържате от приемане на храна и лекарства 4 часа преди да вземете материала. Веднага преди процедурата, изплакнете устата си с преварена вода.
2. Горните правила трябва да се следват, когато се взема проба от вътрешната повърхност на бузата. След изплакване се препоръчва да се направи лек масаж на кожата, за да се изолира секрецията на жлезата.
3. Урината обикновено се събира у дома. За да направите това, трябва да проведете цялостна тоалетна на гениталиите. Необходимо е да се съберат 50-60 ml урина в стерилен пластмасов контейнер. За да се гарантира чистотата на материала, се препоръчва жените да поставят тампон във влагалището, а мъжете максимално да издърпват кожната гънка. Не можете да вземете материала по време на менструалния поток.
4. За доставката на сперматозоиди трябва да се въздържате от сексуален контакт за 3 дни преди да вземете материала. Също така, лекарите съветват да откажат да посетят сауната и да вземат гореща вана, да пият алкохол и пикантна храна. 3 часа преди теста, трябва да се въздържате от уриниране.
5. За доставянето на урогенитално намазка, например, ако се извърши анализ на хламидиа PCR, се препоръчва на жени и мъже да имат сексуална почивка в продължение на 3 дни. 2 седмици преди теста не трябва да се вземат антибактериални лекарства. За една седмица трябва да спрете използването на интимни гелове, мехлеми, вагинални супозитории, спринцовки. 3 часа преди теста, трябва да се въздържате от уриниране. По време на менструацията, събирането на материала не се извършва, само след 3 дни след спирането на кръвообращението може да се направи урогенитално намазка.

PCR по време на бременност

В периода на очакване на бебето много инфекциозни болести, предавани по полов път, са изключително опасни за нормалното развитие на плода. СБМ могат да предизвикат вътрематочно забавяне на растежа, спонтанен аборт или преждевременно раждане, вродени малформации на детето. Поради това е изключително важно да се премине ранно PCR тест. Необходимо е анализът да бъде представен при регистрация - до 12 седмици.

Материалът се взема от цервикалния канал със специална четка. Процедурата е безболезнена и не представлява опасност за бебето. Обикновено по време на бременност хламидията се анализира чрез PCR метода, както и уреаплазмоза, микоплазмоза, цитомегаловирус, херпес и папиломавирус. Такъв комплекс от изпити се нарича PCR-6.

PCR за ХИВ диагноза

Поради факта, че методът на полимеразна верижна реакция е много чувствителен към промените в тялото и условията на диагнозата, много фактори могат да повлияят на резултата. Поради това PCR анализът за HIV инфекцията не е надежден метод, неговата ефективност е 96-98%. В останалите 2-4% от случаите, тестът дава фалшиви положителни резултати.

Но в някои ситуации ХИВ не може да бъде избегната без диагностика на PCR. Обикновено се прилага при хора с фалшиво отрицателен резултат от ELISA. Такива индикатори показват, че човекът все още не е развил антитела срещу вируса и те не могат да бъдат открити без многократно увеличаване на броя. Това може да се постигне чрез провеждане на кръвен тест, като се използва PCR метод.

Също така, тази диагноза е необходима за деца от първата година от живота, родени от HIV-позитивна майка. Методът е единственият начин за надеждно определяне на състоянието на детето.

PCR за диагностициране на хепатит

Методът на полимеразна верижна реакция позволява да се открие ДНК на вируса на хепатит А, В, С дълго преди образуването на антитела срещу инфекция или появата на симптоми на заболяването. Особено ефективен е анализът на PCR за хепатит С, тъй като в 85% от случаите подобно заболяване протича безсимптомно и без навременното лечение преминава в хроничен стадий.

Навременното откриване на патогена ще помогне да се избегнат усложнения и продължително лечение.

Изчерпателно изследване на PCR

Комплексен анализ на PCR: какво е това? Това е метод верижна реакция изследване polimezarnoy който включва едновременно определяне няколко типа инфекции: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma Hominis, Gardnerella Vaginalis, Candida, Trichomonas, цитомегаловирус, ureaplasma urealichyum, херпес от първи и втори вид, гонорея, папиломавирус. Цената на тази диагностика варира от 2000 до 3500 рубли. в зависимост от клиниката, използваните материали и оборудване, както и от типа анализ: качествен или количествен. Какво е необходимо във вашия случай - лекарят ще реши. В някои случаи е достатъчно просто да се определи присъствието на патогена, а в други, например, с ХИВ инфекция, важна роля играе количественият титър. При диагностициране на всички горепосочени патогени тестът се нарича "PCR-12 анализ".

Обяснение на резултатите от анализа

Декодирането на PCR анализа не е трудно. Има само 2 скали на индикатора - "положителен резултат" и "отрицателен резултат". Ако се открие патоген, лекарите могат да потвърдят наличието на заболяването с 99% увереност и да продължат лечението на пациента. В количествения метод за определяне на инфекцията в съответната колона ще бъде показана цифровата стойност на откритите бактерии. Само лекарят може да определи степента на заболяването и да предпише необходимото лечение.

В някои случаи, например, при определяне на HIV инфекцията чрез PCR, ако резултатът е отрицателен, е необходимо да се проведат допълнителни тестове, за да се потвърдят резултатите.

Къде да направите анализа?

Къде мога да направя PCR анализа: в държавната поликлиника или в частна лаборатория? За съжаление в общинските лечебни заведения оборудването и методите често са остарели. Поради това е по-добре да се даде предимство на частните лаборатории със съвременно оборудване и висококвалифициран персонал. Освен това в частна клиника ще получите резултати много по-бързо.

В Москва много частни лаборатории предлагат PCR анализ за различни инфекции. Например, в клиники като Вита, Комплексна клиника, Happy Family и Uro-Pro се извършва PCR анализ. Цената на изпита е от 200 рубли. за дефиницията на един патоген.

Може да се заключи, че диагнозата на инфекциозни заболявания чрез метода на PCR е в повечето случаи бърз и надежден метод за откриване на патогена в организма в ранните етапи на инфекцията. Но в някои случаи е полезно да изберете други методи за диагностика. Необходимостта от провеждането на такова проучване може да бъде определена само от специалист. Декодирането на PCR анализа също изисква професионален подход. Следвайте препоръките на лекаря и не давайте тестове, които не са необходими.