Тинкторни свойства са какво?

Преди да се изследват микроорганизмите под микроскоп, изследваната проба се подлага на специална подготовка. В естествена форма, почти всички бактерии са прозрачни, така че са оцветени с багрила. Оцветяването ни позволява да определим както морфологичните свойства на разследваните микроби, така и тяхната принадлежност към един или друг вид. Способността на микроорганизмите да възприемат оцветители се нарича танкерни свойства. С тяхна помощ биолозите определят вида на микробите, неговите параметри, характеристиките на структурите и също така идентифицират патогени на инфекциозни заболявания. От тази статия ще научите по-подробно, че това са тинтериални свойства и как те се използват в науката.

Задачите, които методът за оцветяване решава

На първо място, нека разберем каква е значимостта на тънкостолните свойства на микроорганизмите. Оцветяването на пробата е една от основните техники на микробиологията, позволявайки да се изследват както външната, така и вътрешната структура на организмите. Бактериите са полупрозрачни микроорганизми, които отразяват светлинните лъчи. Следователно, при обикновена микроскопия, те не могат да бъдат взети под внимание. Различни части от бактериите взаимодействат различно с багрилото. Тинкторни свойства са отлична възможност за изследователите. Като се различават в различните микроорганизми, те ни позволяват да определим най-важните им характеристики: форма, размер, структура, местоположение и т.н.

Подготовка на пробата и нейното оцветяване

Независимо коя техника на багрене изследователят практикува, тази процедура се състои от няколко задължителни стъпки:

1. Подготовка на пробата. В капката вода, поставена върху плъзгача, изследваният материал се въвежда чрез бактериологичен цикъл.
2. Изсушаване на смазката. Извършва се при стайна температура или в поток топъл въздух (но не твърде близо до източника на топлина).
3. Фиксиране. Предполага фиксирането на микроорганизми върху стъклото, за да се повиши тяхната чувствителност към оцветяване.
4. Оцветяване. Багрилото се прилага върху пробата за изпитване и се оставя да престои известно време. След това остатъците от боята се отстраняват и пробата се промива с вода.
5. Сушене. Последният етап, който ви позволява да се отървете от остатъците от вода след изплакване. След изсушаване пробата е готова за изследване под микроскоп.

Общи бои

Оцветяването на пробите се извършва с помощта на анилин багрила с различен киселинен индекс (рН). Те са разделени на: основни (стрес върху второто буква o), киселинни и неутрални.

В основни багрила действащият агент е катион. С помощта на различни реагенти е възможно да се получат различни цветове на оцветяване на микроби:

1. Червен - пиронин, сафранин, неутрален и магента основен.
2. Виолет - тионин, метил, тинтява и кристален виолет.
3. Синята е метиленово синьо и Виктория.
4. Зелен - малахит и метиленови зеленчуци.
5. Черното е индулин.
6. Браун е везувин и хрисоид.

В кисели багрила анионът е прикрепен към оцветяващите свойства. От тях най-често срещаните са:

1. Червено-кисел фуксин и еозин.
2. Черното е нигрозин.
3. Жълтата е пиронова киселина.

Неутралните багрила могат да оцветяват както аниони, така и катиони. Като поразителен пример за тях може да се нарече родамин V.

Съществуващите методи на оцветяване, базирани на тънкостолните свойства на микроорганизмите, могат да бъдат разделени на три основни вида: жизнено, постурално и спорово оцветяване. Ще разгледаме по-подробно всеки от тези методи.

Важният начин

Този метод се нарича интравитален, поради което оцветяването се извършва, за да се микроскопират живите организми. Въвеждането на оцветяващото лекарство позволява да се изследват характеристиките на вътреклетъчните структури и тъкани. Съществуват и методи за жизнено оцветяване, което предполага убиването на пробата непосредствено след оцветяването.

За интравиталното оцветяване се използват специални багрила, които се характеризират с ниска токсичност и висока проникваща мощност. В допълнение към жизнените препарати, флорохроми или флуоресцентни багрила също се използват за решаване на този проблем.

Постурален път

За разлика от предишната версия, тук оцветяването се извършва след убиване на микроорганизми. Методите за пост-оцветяване са разделени на прости и сложни. Обикновено могат да се определят морфологичните свойства на изследваните организми: форма, размер, местоположение, местоположение. Комплексните методи са тясно фокусирани и позволяват получаване на информация за структурата на микроорганизма. Най-често сложните методи за оцветяване носят имената на техните създатели. От тях следните методи са най-популярни.

Методът на Грам. Методът, разработен в края на 19 век, се основава на диференциацията на микробите от пропускливостта на клетъчните стени. Използване на багрила на обработка на пробата анилин (тинтява виолетово или метил), и следващо промиване изследовател получава два вида микроби: Грам-положителни (син цвят характерни) и Грам (обезпечени). За да се получи по-цялостна картина, се използва и червено багрило, след третирането дори грам-отрицателните микроорганизми придобиват цвят - от розово до червено.

Методът на Грам позволява класифицират микробите и да извършат отделянето им според тинеологичните свойства. Това е един от най-простите и най-често срещаните методи за подготовка на проба за микроскопия. Приложена стойност на тази техника е диагностицирането на различни инфекциозни заболявания.

Методът на Цийл-Нилсен. Този метод е разработен и в края на XIX век. Той се основава на определянето на киселинната устойчивост на бактериите чрез оцветяване. По този начин, благодарение на тънкостолните свойства на микроорганизмите, е възможно да се идентифицират патогени на туберкулоза, проказа и микобактериоза.

Методът Romanovsky-Giemsa. Този метод е разработен още в началото на ХХ век. Нейната същност се крие във факта, че след оцветяване на пробата със специално боядисване, ацидофилните бактерии придобиват различни нюанси на червено и базофилни бактерии - от лилаво до синьо.

Ацидофилите наричат ​​мляко и оцетна киселина бактерии, за чийто живот е необходима ниска киселинност на средата. Базофилите са микроби, които могат да бъдат оцветени с основни багрила. По този начин, методът се основава на отделянето на микробите от стойността на киселинността на средата. Той се използва широко при изследването на морфологията на протозоите и спирохтите.

Методът Burry-Hins. Тя позволява да се определи наличието на бактерии в капсулите.

Методът на Морозов. Този метод на оцветяване прави възможно да се направят видими бактериите на бактериите. За целта е необходимо да се извършват такива манипулации:

1. Извадете пробата с киселина, за да позволите на бедрата да се разхлаби.
2. Прикрепете разхлабената кърпа с танин.
3. Пробата се оцветява със сребърен нитрат.

В резултат на това, бактерията, с всичките си флагчета, става видима. Цветът му може да варира от жълт до кафяв.

Спорово оцветяване

Тенктореалните свойства на микроорганизмите правят възможно с помощта на оцветяването да се забелязват спорите. За тази цел най-често се използва техниката Tsilya-Nilson. Същността му се състои в обработката на пробата за анализ с фуксин Tsil и нейното допълнително обезцветяване с помощта на 1% сярна киселина. В резултат на това спорите са оцветени в розово и изпъкват добре на фона на сините бактерии.

За да получи видима представа за спора, техниката на Оржеско също позволява. Съгласно този метод, черупките на спорите първо се ецват при висока температура с киселина и след това се използва оцветяването на Ziehl-Nilson.

Структурни особености на микробите

Клетката на микроорганизма обикновено се състои от техните стени (мембрана), цитоплазмична мембрана, цитоплазма, съдържаща нуклеотид и включвания в състава му. Някои видове микроби също притежават фрагменти, пили или резени и могат да образуват капсули или спори.

Обвивката на микроорганизма определя формата му и го предпазва от неблагоприятни условия на околната среда и осмотично вътрешно налягане. Стените на микробите имат доста сложен химичен състав и структура. В грам-положителни и грам-отрицателни клетки те се различават. Първите имат дебела клетъчна стена, съдържаща теихолови киселини и няколко липиди. Стената на втората се състои от техните полипептидни и полизахаридни слоеве.

Външната страна на клетката е покрита със слой от лигавицата. При някои микроби тя може да се увеличи (набъбне), като се образува капсула, състояща се предимно от полизахариди и понякога от полипептиди. Тя не реагира на оцветяването. Ето защо тези микроби се изследват с помощта на метода Burri-Hins. При някои патогени (например пневмококи), капсулата се образува само в организми от животни или хора.

В проучването на микробите под микроскоп се обръща внимание и на оцветяването на цитоплазмата и нейните структури. Цитоплазмата може да бъде оцветявана хомогенно (хомогенно) или хетерогенно (включени са органични или неорганични примеси). За изследване на включенията се използват специални методи за оцветяване (например, според Neisser). В допълнение, наличието на ядро ​​или нуклеотид се определя в цитоплазмата.

След като научихме, че това са тинтериални свойства и как те помагат в микроскопията, ще разгледаме характеристиките на някои общи микроби.

стрептококи

От гледна точка на тентериалните свойства, стрептококите са Грам-положителни микроорганизми, така че те се определят чрез Грам метод. Най-ярките цветове на тези бактерии се появяват при излагане на синия лафер. Структурата на клетките им прилича на верига.

салмонела

Те са факултативни анаеробни, повечето от които са подвижни поради наличието на флагели. На гъста хранителна среда салмонелите се събират в кръгли бели-сиви колонии. Спорът не се образува, има перитрии и микрокапсули. Подобно на стрептококи, салмонелите се оцветяват по грамския метод. Разликата се крие във факта, че тинкторите на салмонелата са грам-отрицателни.

менингококи

Те имат закръглена полиморфна форма. На хранителната среда са разположени по двойки. Тенкторните свойства на менингококите са такива, че те са грам-отрицателни, но не отговарят ясно на Gram оцветяването. Неравномерното оцветяване се дължи на факта, че колкото по-старата е клетката, толкова по-слаби са нейните тънкостни свойства. Флагелът няма менингококи, но не образува спор.

Холера Вибрио

Този микроб има един полярен флагел, който е оборудван с обвивка и вълнообразна мембрана. Холера вибрио има изразена мобилност. Тя се характеризира с полиморфизъм. Тенкториалните свойства на холера вибрио причиняват оцветяването му с анилинови багрила. Като правило, това е вода fuchsin Pfeifer или carbolic fuchsin Shlya.

Е. coli

Това е по избор анаероб, който не образува спор. Клетките са под формата на пръчки с заоблени краища. Тенктореалните свойства на Escherichia coli го пренасят грам-отрицателни бактерии. Щамове бактерии с пери-трихиално разположени флагели могат да се движат.

неутрофилите

Това име е било дадено на микробите, поради тънкостите им. Неутрофилите могат да бъдат интензивно оцветени съгласно метода Romanovsky, както базови багрила, така и киселинен еозин. Възрастните бактерии имат сегментирано ядро, което означава, че принадлежат към полиморфонуклеарни клетки. Те са надарени с лепкавост, подвижност и способност за хемотаксис и улавяне на частици. Заедно с базофилите и еозинофилите принадлежат към гранулоцитите.

базофили

По аналогия с предишни микроби, тези бактерии са получили името си поради тинеологични свойства. Базофилите са силно оцветени с основната боя и не са напълно оцветени с кисел еозин. Те имат големи гранулоцити и съдържат много: хистамин, серотонин, простагландини, левкотриени и други медиатори на възпалителни и алергични процеси.

еозинофили

За разлика от двете предишни гранулоцити, тези микроби се оцветяват интензивно само с киселинна боя и не се оцветяват с основните препарати. Еозинофилите са надарени с способност за екстравазация, хемотаксис и амебоидно движение. Те могат да абсорбират и да обвързват редица медиатори на възпалителни и алергични реакции.