Микробиологични методи за изследване на водата, почвата, въздуха

Микроорганизмите са най-малките, най-вече едноклетъчни същества, широко разпространени в природата. Те се намират във всички среди (въздух, почва, вода), при хора и животни, в растения.

Качеството разнообразие и броят на микроорганизмите зависят главно от хранителните съставки. Важни обаче са влажността, температурният режим, аерирането, действието на слънчевите лъчи и други фактори.

Методи на санитарно-микробиологични изследвания природните среди могат да открият наличието на патогенни микроорганизми, да определят техния брой и в съответствие с получените резултати да разработят мерки за елиминиране или предотвратяване на инфекциозни заболявания. Освен това е необходимо количествено счетоводство за моделиране на екосистемите и разработване на принципи за управление на природните процеси. Нека разгледаме по-нататък какво се случва методи за микробиологично изследване.

почва

Смята се от учените за един от възможните начини за предаване на инфекциозни патологии. С изолирането на болни хора или животни, патогенни микроорганизми проникват в почвата. Някои от тях, по-специално спорите, могат да останат в земята дълго време (понякога няколко десетки години). В почвата влизат патогените на такива опасни инфекции като тетанус, антракс, ботулизъм и т.н. Методи за санитарно-микробиологично изследване на почвата позволяват да се определи "микробния брой" (брой микроорганизми в грам почва), както и коли-индекс (броя на Е. coli).

Анализ на почвата: обща информация

K методи за микробиологично проучване на почвата На първо място, директна микроскопия и засяване на плътни хранителна среда. Популациите на микроорганизми и техните групи, обитаващи почвата, се различават в тяхното таксономично положение и екологични функции. В науката те са обединени под общия термин "почвена биота". Грунт е местообитанието на огромен брой микроорганизми. Един грам почва съдържа от 1 до 10 милиарда от клетките си. В тази среда протича разграждането на органични вещества с участието на различни сапрофитни микроорганизми.

Микроскопски метод за микробиологично изследване: етапи

Анализът на околната среда започва с вземане на проби. За да направите това, използвайте предварително почистени и търкани алкохол нож (можете да използвате лопата). След това пробата се приготвя. Следващата стъпка е преброяването на клетки върху оцветени петна. Нека разгледаме всеки етап поотделно.

Вземане на проби

Когато се анализира обработваемата земя, обикновено се вземат проби от дълбочината на целия слой. Първо, отстранете 2-3 cm от горната част на почвата, тъй като тя може да съдържа чужда микрофлора. След това се вземат монолити от изследваното място на почвата. Дължината на всяка от тях трябва да съответства на дебелината на слоя, от който трябва да вземете проба.

На площ от 100-200 квадратни метра. m, взети са 7-10 проби. Теглото на всеки от тях е около 0,5 кг. Пробите трябва да бъдат внимателно смесени в чантата. След това вземете средна проба с тегло около 1 кг. Тя трябва да бъде поставена в пергамент (стерилна) чанта, вградена в торбичка за тъкани. Преди направения директен анализ пробата се съхранява в хладилника.

Подготовка за изследвания

Смесената почва се излива върху сухото стъкло. Предварително трябва да се търкат с алкохол и да се изгорят над горелката. Използвайки шпатула, почвата се размесва добре и се разпределя равномерно. Без неуспех е необходимо да се премахнат корени, други външни елементи. За това се използват пинсети. Преди работа пинсети и шпатула се калцинират над горелката и се охлаждат.

От малки части от почвата, разпределени върху стъклото, се вземат малки порции. Те се претеглят в порцеланова чаша на техническа скала. Задължителен етап на микроскопия метод за микробиологично изследване е специална обработка на проби. Необходимо е предварително да се приготвят 2 стерилни колби. Капацитетът им не трябва да надвишава 250 ml. 100 ml чешмяна вода се изсипва в една от колбите. От нея се вземат 0.4-0.8 ml течност и се овлажнява пробата от почвата в пастообразно състояние. Сместа трябва да се трие с пръст или гумено петлице в продължение на 5 минути.

С вода от първата колба, почвената маса се прехвърля в празна колба. След това отново се търка. След това масата се прехвърля в колбата близо до пламъка на горелката. Контейнерът със суспензията на почвата се разклаща върху колелцето за 5 минути. След това се оставя да се уталожи за около 30 секунди. Това е необходимо, за да се уредят големите частици. След половин минута масата се използва за приготвяне на препарата.

Клетки, отчитащи фиксирани намазки

Директно микроскопично изследване на почвата се извършва от метод за микробиологично изследване, разработен от Виноградски. В определен обем от приготвената суспензия се брои броят на микроорганизмите клетки. Проучването на фиксирани намазки ви позволява да спасите лекарства за дълго време и да извършвате изчисления във всяко удобно време.

Приготвянето на лекарството е както следва. Определен обем от суспензията (обикновено 0,02-0,05 ml) се прилага с микропипета върху плъзгача. Към него се добавя капка агар-агарен разтвор (смеси от полизахариди агаропектин и агароза, извлечена от кафяви и червени водорасли на Черно море), бързо се смесват и се разпределят на площ от 4-6 кв. М. виж Размазването се изсушава във въздуха и се фиксира за 20-30 минути. алкохол (96%). След това препаратът се навлажнява с дестилирана вода, поставя се в разтвора на карболовия еритрозин за 20-30 минути.

След оцветяването се промива и се изсушава на въздух. Клетките се преброяват с цел потапяне.

Сеене на гъста среда

микроскопичен методи за микробиологично изследване могат да открият голям брой микроорганизми. Но въпреки това този метод сеитбата се счита за най-разпространената практика. Същността му се състои в засяване на обема на препарата (суспензия на почвата) в петриева чиния върху гъста среда.

това метод за микробиологично изследване ни позволява да вземем предвид не само количеството, но и състава на групата и в някои случаи видовия състав на микроскопичната флора. Броят на колониите се прави, като правило, от дъното на петриевото блюдо в предаваната светлина. На преброената секция точката се поставя с маркер или мастило.

Анализ на водата

Микрофлората на водното тяло, като правило, отразява микробния състав на почвата около него. В това отношение, методи за санитарно и микробиологично изследване на водите и почвата имат особена практическа стойност в изучаването на състоянието на определена екосистема. Пресните езера съдържат като правило коки, пръчковидни бактерии.

Анаеробите във вода се намират в малки количества. Като правило, те се възпроизвеждат в дъното на резервоарите, в прах, участвайки в процесите на пречистване. Микрофлората на океаните и моретата се представя предимно от солени (халофилни) бактерии.

Почти няма артезиански кладенци на микроорганизми във водата. Това се дължи на способността за филтриране на почвения слой.

общоприетите методи за микробиологично изследване на водата се взема предвид определянето на микробно число и колит или индекс на коли. Първият индикатор характеризира броя на бактериите в 1 ml течност. Количественият индекс е броят на Е. coli, присъстващ в един литър вода, и колотният титър е минималното количество или максималното разреждане на течността, в която те все още могат да бъдат открити.

Определяне на микробното число

Този метод за санитарно микробиологично изследване на водата е както следва. В 1 ml вода се определя количеството на факултативните анаероби и мезофилни (междинни) аероби, които са способни да разбъркват месо с агар (основната хранителна среда) при 37 ° С. през деня, за да образува колонии, видими с увеличение от 2-5 r. или с невъоръжено око.

Ключовият етап на метод за микробиологично изследване на водата сея. От всяка проба се посяват най-малко 2 различни обеми. Когато се анализира водата от чешмата, към всяка чаша се добавят 1-0,1 ml чиста течност и 0,01-0,001 ml замърсена течност. За сеитба 0,1 ml или по-малко, течността се разрежда с дестилирана (стерилна) вода. Подгответе последователно десеткратни разреждания. 1 ml от всеки от тях се добавя към две петриеви блюда.

Разрежданията се пълнят с хранителен агар. Той трябва да бъде предварително стопен и охладен до 45 ° С. След активно смесване средата се оставя върху хоризонтална повърхност, за да се втвърди. На 37 градуса. културите се отглеждат през целия ден. в процес на преразглеждане метод за микробиологично изследване на водата позволява да се вземат предвид резултатите от тези чаши, където броят на колониите е в диапазона от 30 до 300.

въздух

Той се счита за транзитна среда за микроорганизми. Основното методи за микробиологично изследване на въздуха утаяване (утаяване) и аспирация.

Микрофлората на въздушната среда условно се разделя на променлива и константа. Първите включват дрожди, пигмент-образуващи коки, спориферни бацили, пръчки и други микроорганизми, устойчиви на сушене, излагане на светлина. Представителите на променливата микрофлора, проникващи във въздуха от обичайното за тях местообитание, не издържат дълго от жизнеспособността си.

Във въздуха на големи мегаполиси микроорганизмите са много повече, отколкото във въздушната среда на селските райони. Над моретата горите на бактериите са много малко. Изчистването на въздуха се улеснява от валежите: сняг и дъжд. В затворени помещения на микроби много повече, отколкото в открити пространства. Тяхната сума се увеличава през зимния период при липса на редовно излъчване.

утаяване

това метод за микробиологично изследване в микробиологията се счита за най-простият. Той се основава на утаяването на капчици и частици върху повърхността на агара в отворена петриева паничка под действието на гравитацията. Методът на утаяване не определя точно броя на бактериите във въздуха. Факт е, че на открита чаша за улавяне на малки фракции прахови частици и бактериални капки е доста трудно. На повърхността се задържат главно големи частици.

Този метод не се използва при анализа на атмосферния въздух. Тази среда се характеризира с големи колебания в скоростта на въздушния поток. Утаяването обаче може да се използва при отсъствие на по-сложни инструменти или източник на електроенергия.

Определянето на микробното число се извършва съгласно метода на Omelyansky. В съответствие с него, за 5 минути на повърхността на агар с площ от 100 квадратни метра. cm установява броя на бактериите, които се намират в 10 литра въздух.

Заповед 535 "Относно унифицирането на микробиологичните методи за изследване"

Бактериологичният анализ заема важно място в комплекс от клинични и лабораторни дейности, насочени към диагностицирането, профилактиката и лечението на различни инфекциозни заболявания. Те обаче не се ограничават до изследванията на околната среда.

От особено значение е бактериологичният анализ на биологичния материал в лечебните заведения. За изследванията, прекарани в лечебните заведения, се поставят високи изисквания. Целта на Заповедта "Обединяване на микробиологичните методи на изследванията" е да подобри бактериологичния анализ, да подобри качеството и ефективността на микробиологичната диагностика.

Микроскопско изследване смазки за жени

Това е ключов метод за анализ при диагностицирането на полово предавани инфекции и опортюнистични заболявания (причинени от опортюнистични бактерии).

Микроскопският анализ ви позволява да оцените качествения и количествен състав на микрофлората, да проверите правилността на вземането на проби. Например, наличието на вагинален епител в петна, взета от цервикалния канал, показва нарушение на правилата за подбор биологичен тест.

Струва си да се каже, че микробиологичното изследване в този случай обикновено е придружено от някои проблеми. Те са свързани с факта, че в долните части на гениталния тракт обикновено има разнообразна микрофлора, която варира в различни възрастови периоди. За да се подобри ефективността на проучването, бяха разработени унифицирани правила.

Диагностика на вирусни инфекции

Извършва се чрез методи за откриване на РНК и ДНК патогени. Те се основават главно на определянето на нуклеотидните последователности в патологичния материал. За тази цел се използват молекулни сонди. Те са изкуствено произведени нуклеинови киселини, допълващи вирусни киселини, белязани с радиоактивен маркер или биотин.

Специфична особеност на метода е множественото копиране на специфичен ДНК фрагмент, който включва няколкостотин (или десетки) двойки нуклеотиди. Механизмът на репликация (копиране) е, че завършването може да започне само в определени блокове. За да бъдат създадени, се използват праймери (праймери). Те са синтезирани олигонуклеотиди.

PCR диагностиката (полимеразна верижна реакция) е лесна за изпълнение. Този метод ви позволява бързо да получите резултат, като използвате малко количество патологичен материал. С помощта на PCR диагностиката се откриват остри, хронични и скрити (скрити) инфекции.

С чувствителност този метод се счита за предпочитан. Обаче в момента тестовите системи не са достатъчно надеждни, така че PCR диагностиката не може напълно да замести традиционните методи.